伊維菌素的危害及檢測目的

阿維菌素類藥物（Avermectins，AVMs）由鏈霉菌的發(fā)酵產(chǎn)物中分離的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，包括伊維菌素、多拉菌素、阿維菌素、愛普菌素等品種。阿維菌素類藥物是目前獸醫(yī)臨床上應(yīng)用*泛的獸用驅(qū)蟲藥，被廣泛應(yīng)用于牛、羊等動物，其作用機(jī)理是干擾害蟲神經(jīng)生理活動，致使害蟲出現(xiàn)麻痹而中毒死亡。阿維菌素類藥物雖然作用劑量小，但其脂溶性較高，殘留時間長，世界衛(wèi)生組織將其列為高毒化合物。該類藥物的不規(guī)范使用和食物鏈富集，易引發(fā)運動失調(diào)、呼吸緩慢、中樞神經(jīng)系統(tǒng)中毒等癥狀，甚至致人死亡，對人類健康造成嚴(yán)重威脅，所以應(yīng)對動物性食品中阿維菌素類藥物含量進(jìn)行監(jiān)測。我國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部和國家市場監(jiān)督管理總局2019年發(fā)布的GB 31650-2019《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中獸藥最 大殘留*》中明確規(guī)定了伊維菌素、多拉菌素、阿維菌素、乙酰氨基阿維菌素在動物靶組織中的殘留*。

本文闡述了如何將伊維菌素從樣品基質(zhì)中分離提取出來，并經(jīng)過凈化后，轉(zhuǎn)化成液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀可以檢測的形式。以提取、凈化為重點，依據(jù)國標(biāo)GB/T 22953-2008，為檢測人員和相關(guān)領(lǐng)域研究人員提供一定的參考。

檢測項目：伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿維菌素

應(yīng)用范圍：河豚魚肌肉、鰻魚肌肉、烤鰻

高效液相色譜法

方法原理：河豚魚、鰻魚和烤鰻中殘留的伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留用乙腈提取后，正己烷脫脂，中性氧化鋁柱凈化。樣品溶液供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測，外標(biāo)峰面積法定量。

前處理儀器：

分析天平（感量0.1 mg和0.01 g）；組織搗碎機(jī)；勻漿機(jī)（8000 r/min）；離心機(jī)（4000 r/min）；超聲波水浴；液體混勻器；固相萃取裝置；氮吹儀。 

檢測儀器： HPLC-MS/MS+ESI源

試樣的制備與保存

取樣品約500 g用組織搗碎機(jī)搗碎，裝入潔凈容器作為試樣，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，于零下18 ℃冰箱中保存。制樣操作過程中應(yīng)防止樣品受到污染或殘留物含量發(fā)生變化。

前處理方法

1.提取

準(zhǔn)確稱取2 g組織樣品（準(zhǔn)確至0.01 g）至50 mL離心管中，加入8 mL乙腈，勻漿機(jī)上8000 r/min均質(zhì)20 s，4000 r/min離心5 min，上清液轉(zhuǎn)移至50 mL離心管中；另取一50 mL離心管加入8 mL乙腈，洗滌勻漿刀頭10 s，洗滌液移入前一離心管中，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管，離心管中的沉淀再加入6 mL乙腈，用玻棒搗碎離心管中的沉淀，液體混勻器上振蕩30 s，4000 r/min離心5 min，上清液合并至50 mL離心管中，乙腈定容至25.0 mL刻度，混勻備用。

2.凈化

向上述裝有樣品提取液的50 mL離心管中加入10 mL乙腈飽和的正己烷脫脂，渦旋振蕩1 min，4000 r/min離心5 min，棄去上層正己烷，重復(fù)此操作一次，下層乙腈溶液待用。

將中性氧化鋁凈化柱安置在固相萃取裝置上，準(zhǔn)確移取10.0 mL已脫脂的樣品提取液至中性氧化鋁凈化柱中，控制流速在1 mL /min～2 mL /min，用2 mL×2乙腈淋洗凈化柱，收集全部流出液，流出液轉(zhuǎn)移至吹氮管中，50 ℃下氮氣吹至干，用1.00 mL乙腈溶解殘渣，并置超聲波水浴中超聲振蕩10 min，0.2 μm濾膜過濾，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定。

國標(biāo)解讀及注意事項

1.標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)用乙腈配成100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，在零下18 ℃保存。

2.本方法通過乙腈提取，正己烷脫脂，中性氧化鋁柱凈化的方式進(jìn)行目標(biāo)化合物的提取凈化。

3.本方法采用洗滌均質(zhì)刀頭，三次提取的方式，提高目標(biāo)化合物的回收率。

4.氧化鋁柱凈化過程中除了活化溶液，其余溶液（上樣液和淋洗液）都要收集。為保證凈化效果，過柱時需要控制流速，使溶液一滴一滴地流下?？捎蒙唐坊闹行匝趸X固相萃取柱替代方法中手工填充的中性氧化鋁凈化柱。

5.由于該類化合物沒有對應(yīng)的同位素內(nèi)標(biāo)用于回收率的校正，所以本方法使用空白樣品提取液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液，進(jìn)行定量。

參考文獻(xiàn)

GB/T 22953-2008 河豚魚、鰻魚和烤鰻中伊維菌素、阿維菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿維菌素殘留量的測定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

河豚魚、鰻魚中伊維菌素殘留量測定的前處理流程圖：